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快看看你是不是用這個方法操作DNA提取試劑盒的
點擊次數(shù):1916 更新時間:2022-04-18
DNA提取試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。
樣本處理及要求:
1、組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
DNA提取試劑盒的操作步驟:
1、標準品的加樣:設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
2、加樣:分別設(shè)空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
4、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5、配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
7、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
8、終止:每孔加終止液50μl,終止反應。
9、測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。